Introducción: Blanco de calcoflúor (BCF) es una tinción fluorescente que permite observar estructuras micóticas en distintas muestras clínicas gracias a la afinidad que tiene por la quitina. La microscopía en campo oscuro facilita la visualización correcta de los patógenos lo que favorece el diagnóstico oportuno y correcto de los pacientes. Por lo tanto, este trabajo tiene como objetivo evaluar la capacidad de identificación de estructuras micóticas en diferentes muestras biológicas de la coloración de blanco de calcoflúor. Materiales y métodos: se evaluaron 36 muestras biológicas (flujo vaginal, lavado broncoalveolar, líquido cefalorraquídeo, escamas, orina, córnea, hemocultivo y biopsia) en busca de hongos. Todas las muestras fueron procesadas por medio de las tres técnicas: hidróxido de potasio (KOH) al 20%, cultivo micológico y blanco de calcoflúor. Resultados: la técnica de KOH dio un resultado positivo en 58,3% de los casos, el cultivo en el 69,4% y la tinción con blanco de calcoflúor en el 72,2%. La sensibilidad y la especificidad de la técnica de BCF frente al KOH fue de 95% y 67% respectivamente, mientras que frente cultivo micológico fue de 100% y 91%. Conclusiones: este estudio demuestra que la técnica de BCF es un buen método para la identificación de estructuras micóticas en las muestras clínicas debido a que demostró unaalta sensibilidad y especificidad en relación con el método tradicional y el cultivo.