La temperatura ambiental es un factor influyente en el bienestar animal y su impacto se refleja principalmente en la salud y productividad. El objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto de la temperatura ambiental mínima sobre producción y calidad de leche en vacas Holstein, realizando control lechero en fincas del departamento de Nariño (Pasto, Pupiales y Guachucal). Se registró el volumen de leche producido por vaca en el día del control y se obtuvieron muestras de leche para su posterior análisis (grasa, proteína, sólidos totales y células somáticas). La información de temperatura ambienta se obtuvo de las estaciones meteorológicas del Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales (Ideam) cercanos a los hatos. Se empleó un modelo lineal mixto que contempla el efecto fijo de la temperatura ambiental mínima, número de parto, días de lactancia y, como efecto aleatorio, el distrito lechero. Los resultados muestran que la composición de la leche y el conteo de células somáticas no fueron afectados por las temperaturas ambientales mínimas, pero sí hay un efecto significativo sobre la producción de vacas con seis o más partos, pues se dio una disminución de hasta 2.6 l. Esta reducción en la producción de leche posiblemente se atribuye a la disminución del consumo y a la utilización de la energía para la producción de calor y mantenimiento de la temperatura corporal como mecanismo de supervivencia. Para posteriores investigaciones se sugiere incluir variables fisiológicas del animal (temperatura corporal, consumo de materia seca, niveles de cortisol) y del ambiente (precipitación, viento, humedad relativa, radiación solar).