El estudio tuvo como objetivo estimar la seroprevalencia y factores de riesgo para Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en Villavicencio, Colombia. Se tomaron muestras de sangre a 1000 bovinos de doble propósito en 24 fincas. El diagnóstico se realizó mediante ELISA indirecta para la detección de anticuerpos. Los factores de riesgo fueron determinados mediante pruebas univariadas y multivariadas. La seroprevalencia general de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis fue 52.4% y la del hato de 100%. Se identificaron como factores de riesgo el sexo hembra, animales mayores de 4 años, y venta de animales. La raza cebú fue considerado como factor de protección.