Antecedentes. Las células troncales se consideran un agente terapéutico prometedor en regeneración de tejidos. El uso de éstas requiere un proceso previo y riguroso de obtención y para su aplicación es esencial el uso de modelos animales. Objetivo: Obtener poblaciones de células troncales de médula ósea de ratas con la conservación en cultivo de las características de troncalidad. Métodos: Este fue un estudio experimental en el que se usaron ratas macho y hembras eutanasiadas del linaje Lewis. Se disecaron los huesos de las extremidades posteriores y, a partir de la médula ósea de estos, se obtuvieron los cultivos primarios a los cuales se les hizo la depleción de las poblaciones CD45+. Las poblaciones libres de CD45 se subcultivaron hasta el pasaje cinco y se evaluaron sus características morfológicas, inmunofenotípicas, de proliferación y la capacidad de diferenciación a tres linajes. Resultados: La evaluación morfológica de los cultivos mostró un predominio de células ahusadas y fibroblastoides que crecieron adheridos y en UFC-F. El inmunofenotipo se caracterizó por la expresión positiva de CD90, CD29 y CD146. Los cultivos inducidos a los linajes osteogénico, condrogénico y adipogénico mostraron un cambio en la morfología y positividad a las tinciones de Rojo de Alizarina, Azul Alcian y Aceite Rojo O, respectivamente. El aumento en la actividad de fosfatasa alcalina corroboró la diferenciación osteogénica en los subcultivos inducidos a este linaje. Conclusión: Se obtuvieron poblaciones de células troncales de médula ósea de ratas que conservaban las características de troncalidad y por lo tanto la posibilidad de usarlas en estudios preclínicos de regeneración de tejidos.