Klebsiella spp, en particular Klebsiella pneumoniae, es causa importante de infección nosocomial. Este microorganismo es con frecuencia resistente a numerosos antibióticos, incluyendo las recientes oxy-imino-cefalosporinas, mediante la producción de b- lactamasas de espectro extendido (BLEE). Se recolectaron 32 aislamientos de K. pneumoniae, resistentes por lo menos a tres grupos diferentes de antibióticos, en cuatro hospitales de tercer nivel de complejidad de la ciudad de Medellín, con el fin de biotipificarlos, establecer su perfil de sensibilidad y determinar la producción de b-lactamasas de espectro extendido (BLEE) y su patrón de bandas plasmídicas. La identificación bioquímica y las pruebas de sensibilidad se determinaron en el sistema Micro Scan. La producción de BLEE se detectó por el método de sinergismo de doble disco, y el perfil de bandas plasmídicas se determinó con el kit plasmid minipreparation de QIAgen y se observó por electroforesis. Los resultados demostraron que K. pneumoniae nosocomial es más frecuente en salas pediátricas (48.8%, 14/32). Las pruebas de susceptibilidad mostraron que 100% de los aislamientos son resistentes a piperacilina y ampicilina y sensibles a ciprofloxacina, ofloxacina, cefotetan e imipenem. La sensibilidad para los demás antibióticos probados fue variable. El 18.8% de los aislamientos presentó sensibilidad a las cefalosporinas de tercera generación. Se identificaron nueve biotipos diferentes, aunque 81% de los 32 aislamientos pertenecieron sólo a tres biotipos. Se observó alto porcentaje de aislamientos productores de BLEE (65.6%). El perfil de bandas plasmídicas mostró ocho patrones diferentes y una banda común. Estos resultados hacen necesario incrementar políticas de control en el uso de antibióticos para limitar la presión selectiva en la flora intrahospitalaria en las instituciones estudiadas.