La proteína de 94 kDa (MED94) de Bacillus thuringiensis subsp. medellin ha sido recono­cida como el principal determinante de la toxi­cidad que esta bacteria exhibe hacia larvas de mosquitos. A partir de una genoteca de ADN total que se evaluó por inmunoblot con anticuerpos policlonales dirigidos contra MED94. se logró identificar, donar y poste­riormeiíte secuenciar el gen que codifica esta endotoxina. En este trabajo se describe la suhclonación de este gen procedente del fagemido pBluecript SK(-) que sirvió como donador.haciendo parte de un fragmento de 3.3 kph flanqueado EcoRI-HindlII (RH3), en dos vectores hifuncionales (pBU4 y pMK3) cu­yos orígenes de replicación son compatibles con B. thuringiensis. Estos plásmidos difie­ren en procedencia. número de copias. mar­cador de selección y estabilidad estructural y segregacional. Al transformar B. thuringiensis suhsp. israelensis por electroporación con cada uno de los constructor, se obtuvieron cepas recombinantes de B. thuringiensis subsp. israelensis 4Q2-81 (cepa acristalífera) y B. thuringiensis subsp. israelensis 1884 (serotipo H 14. usado en formulaciones comerciales), las cuales expresaban el gen introducido, según se evidenció por Western blot y bioensayos de toxicidad. Los recombinantes se analiza­ron mediante Southern blot para detectar la presencia e integridad del gen introducido. También se analizó la expresión de las Ó­enclotoxinas nativas de B, thuringiensis suhsp. israelensis 1884 y se estimó por análisis Probit la concentración letal media (LC50) de pro­teína cristalina corno medida (le la toxicidad hacia larvas de tercer ínstar de Aedes aegypti expuestas a muestras de los cristales parasporales purificados, comparando las ce­pas recombinantes con las cepas silvestres.