Bacillus thuringiensis (Bt), como agente de control biológico, posee ventajas que lo hacen atractivo en el Manejo Integrado de Plagas. La investigación acerca del mismo está en pleno auge y día a día van apareciendo nuevas cepas y productos comerciales, con alto potencial de actividad biopesticida hacia organismos plaga de interés en la agricultura local de diversos países en todo el mundo. Spodoptera frugiperda es una de esas plagas que debido a su efecto devastador sobre algunos cultivos como maíz, algodón, sorgo y arroz, entre otros, y al surgimiento de resistencia a partir de la aplicación de pesticidas convencionales, es susceptible de ser controlada a partir de cepas nativas de B. thuringiensis. En el presente estudio, se pretendió estandarizar un método de bioensayo para evaluar la actividad bioplaguicida de cepas nativas de Bt contra S. frugiperda. Se trabajó en condiciones de laboratorio sobre dieta artificial con larvas de primer ínstar del insecto blanco, empleando la cepa Bt subesp. aizawai HD-137, portadora de los genes cry1Aa, cry1Ab, cry1B, cry1C y cry1D, como cepa de referencia de la actividad bioplaguicida. Se evaluaron veinte cepas nativas de suelos colombianos siguiendo el diseño del método propuesto. Los resultados de este estudio permitieron concluir que el modelo de bioensayo usado cumplió con las especificaciones de ser sensible, eficiente, reproducible y rápido, por lo cual se adoptó y se recomienda su uso para pruebas similares. Adicionalmente, se encontró una actividad bioplaguicida importante en cuatro de las veinte cepas evaluadas, lo cual sugiere una gran diversidad de cepas en cuanto al número de genes que codifican por las difemtes d-endotoxinas y un gran potencial de uso de las mismas en nuestro país.