En el presente trabajo se estableció una metodología de bioensayos para evaluar la actividad insecticida de cepas nativas de Bacillus thuringiensis contra larvas de Spodoptera frugiperda de primer instar en dieta artificial. Las condiciones para el mantenimiento de la cría y para los bioensayos fueron de 25°C de temperatura, 70% de humedad 'relativa y un fotoperíodo de 12 horas-luz. Se utilizaron cepas de referencia y nativas seleccionadas por microscopia, por PCR y SDS-PAGE. Estas cepas presentaron genes del tipo cry 1 los cuales han sido señalados por codificar proteínas con actividad contra Lepidópteros. Se evaluaron las cepas de referencia HD-1 var. kurstaki y HD-137 var. aizawav a una concentración de 150 tg/ml de proteína total la cual se inoculó en vasos que contenían una dieta artificial, colocándose posteriormente una larva de S. frugiperda por vaso. Después de 120 horas de exposición se seleccionó la cepa HD-137 por su alta actividad insecticida como control positivo para los bioensayos. Utilizando esta cepa de referencia y siguiendo la metodología anterior se evaluaron las cepas nativas Bt-127, Bt-147, Bt-292, Bt444, las cuales presentaban diferentes orígenes geográficos. La cepa nativa Bt-127 presentó, entre todas las cepas evaluadas, la mayor actividad insecticida la cual alcanzó un 88% de mortalidad, esta cepa igualmente registró los menores, tiempo letal medio (T150) y concentración letal media (C150) que correspondieron a 24 horas y 83 ug/m1 respectivamente. La cepa de referencia HD-137 presentó resultados significativamente inferiores a los de la cepa nativa Bt-127, estos estuvieron representados por un porcentaje de mortalidad de 79%, un T150 de 48 horas y una C150 de 138 ug/ ml. El efecto insecticida de la cepa de referencia fue seguido por el de la cepa nativa Bt-147; las cepas nativas Bt-292 y Bt-444 presentaron porcentajes de mortalidad inferiores.