Se inició una colección de hongos con potencial biocontrolador, aislados de diferentes regiones de Colombia, con fines docentes, investigativos y de servicio. Se colectaron 110 muestras de material vegetal, insectos muertos y suelo, bajo diferentes coberturas vegetales, desde bosque altoandino húmedo hasta páramo, en los departamentos del Meta, Cauca, Huila, Córdoba y Cundinamarca. Los aislamientos fúngicos se realizaron en medios de cultivo de composición definida y se identificaron 58 con potencial biocontrolador. Del total de aislamientos, el 3,2% fueron entomopatógenos primarios, 20,6% controladores de fitopatógenos, 28,6% entomopatógenos secundarios y 47,6% no biocontroladores. La mayoría de los hongos se aislaron en el departamento del Cauca (67% del total de las muestras), de los cuales el 38,7% provinieron de suelo, 28,6% de material vegetal y 32, 7% entre insectos, frutos y hojarasca. Los aislamientos se conservaron en agua destilada y suelo, y se evaluaron a los 15, 45 y 90 días. Conservaron sus características morfológicas macro y microscópicas. La conservación en agua destilada es el método de elección por su economía, fácil manipulación y recuperación. Los aislamientos se evaluaron in vitro frente a los plaguicidas Furadan, Manzate, Malathion y Benlate a 25 y 250 ppm. Furadan y Manzate redujeron la tasa de crecimiento de todos los hongos significativamente (p< 0.01), con respecto al control negativo y Benlate lo inhibió completamente (p<0.01), en las dos concentraciones. Esta colección servirá de base para posteriores estudios al nivel molecular y fisiológico y para el uso futuro de estos aislamientos como potenciales agentes de control biológico.