El uso de entomonemátodos (EN) en control biológico se vislumbra como una herramienta en programas de Manejo Integrado de Plagas. Su producción es limitada y es necesario buscar alternativas de producción in vivo, económicas y de fácil implementación, para desarrollar trabajos básicos de comportamiento, patogenicidad y actividad biológica en insectos plaga en laboratorio. En este experimento se evaluó la producción in vivo de tres especies de EN (Rhabditida: Steinernematidae) Steinernema carpocapsae Brasil, Steinernema carpocapsae Ali strain y Steinernema cubanum, en dos hospedantes: Gallería mellonella (Lepidóptera: Pyralidae) y Bombyx morí (Lepidóptera: Bombycidae) y dos sistemas de infección: topical e inyección, con el fin de obtener parámetros de producción para la realización de bioensayos. El diseño fue completamente aleatorio, en arreglo factorial 3x2x2, 12 tratamientos con 10 repeticiones (larvas). Variables como producción diaria y acumulada de estados de EN (JI, J4, hembras y machos/larva) y porcentaje de producción de hospedantes, se evaluaron cada 24 horas, desde emergencia de JI hasta el agotamiento del hospedante. Los tratamientos S. carpocapsae Brasil / topical en G. mellonella y S. carpocapsae Ali strain / inyección en B. morí presentaron las mayores producciones acumuladas con 149.258 y 139.756 JI, respectivamente. Así mismo, S. carpocapsae All strain en B. morí/ inyección obtuvo la producción máxima por larva con 395.880 JI. S. cubanum no se multiplicó bajo los sistemas de infección en B. morí, pero si lo hizo en G. rnellonelle, observándose especificidad por hospedante. G. mellonella / topical y B. mori / inyección presentaron las producciones mayores de JI, entre el tercer y quinto día, período para realizar las colectas de EN. G. mellonella se ratifica como hospedante efectivo; sin embargo, B. mori es una alternativa para producción in vivo de EN.