Mycoplasma haemofelis es la especie hemotrópica más patogénica que afecta a los felinos parasitando los glóbulos rojos e induciéndoles un proceso hemolítico que puede terminar en anemia. El presente estudio tuvo como objetivo determinar la prevalencia de dicha infección en felinos domésticos de la ciudad de Pereira, Risaralda, Colombia. Se analizaron las muestras de 104 felinos domésticos entre 1 y 10 años de edad. Se tomaron muestras de sangre para el análisis citológico (parámetros hematológicos) y molecular por PCR. Adicionalmente se evaluaron los posibles factores de riesgo asociados con la presencia de M. haemofelis (edad, sexo, estado de vacunación y zona geográfica de procedencia). La prevalencia mediante el análisis molecular fue de 80.8%, en tanto que con la coloración de Giemsa fue de 80.7% y con Wright de 81.7%, siendo los animales más jóvenes (1-2 años) los más afectados. Se evidenció una correlación estadística significativa (p=0.0038) de la edad con la infección como un factor de riesgo asociado en esta zona del país.