Se extrajo el aceite esencial de Lippia origanoides H.B.K. utilizando dos técnicas, Hidrodestilación Asistida por Microondas (MWHD) y Destilación por Arrastre con Vapor (DAV), con tiempos de operación óptimos de 60 y 90 minutos respectivamente, obteniendo mejores porcentajes de rendimiento para la MWHD, con hojas en estado seco. El análisis del aceite esencial por Cromatografía de Gases Acoplado a Detector de Masas mostró que el compuesto mayoritario fue el Timol. La actividad antimicrobiana del aceite esencial se evaluó en bacterias Gram–positivas y Gram–negativas, hongos filamentosos y levaduras, utilizando diferentes concentraciones de aceite, en porcentaje V/V con etanol al 98%. La acción antimicrobiana fue mayor en los microorganismos Gram–positivos y en los hongos y levaduras.