El uso de antibióticos en el tratamiento de la mastitis en la industria lechera, ha acarreado una problemática con potencial impacto en la salud pública, como la resistencia antimicrobiana. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la acción antimicrobiana del extracto alcohólico de hojas, tallos y flores de Tithonia diversifolia sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli en cultivo in vitro. Se evaluó el efecto inhibitorio en el crecimiento bacteriano a través de un ensayo de sensibilidad. En ambas bacterias el control positivo presentó un halo de inhibición superior a 30 mm, con diferencia significativa de los extractos de T. diversifolia. Los cuales presentaron para S. aureus un halo de 9.7 y 10.4 mm y para E. coli de 6.5 y 9.4 mm para tallo-hoja y flores respectivamente. El extracto alcohólico de flores de T. diversifolia se perfila como una herramienta potencial para inhibir el crecimiento bacteriano.
 Palabras claves: Bioensayo, Escherichia coli, extracto alcohólico, Staphylococcus aureus, halo de inhibición, mastitis.