Lentinula edodes es una seta comestible con potencial para el desarrollo de nutraceúticos. Sin embargo, son incipientes los trabajos enfocados en su producción biotecnológica y el desarrollo de herramientas analíticas que permitan profundizar en su composición. En esta investigación se estudió la producción de biomasa del hongo en el tiempo mediante fermentación en estado líquido y se seleccionaron las condiciones que permiten la obtención de extractos para la aplicación de herramientas para análisis proteómicos. Los métodos de extracción de proteínas, ácido tricloroacético (TCA)-Acetona y TCA-Acetona-Fenol, fueron comparados en términos del rendimiento de extracción y los perfiles de separación usando electroforesis en 1D (SDS-PAGE) y 2D (IEF-SDS PAGE). Se determinó que a los 10 días de crecimiento se obtiene la mayor producción de biomasa y proteína total. La extracción con TCA-Acetona-Fenol presentó un mayor rendimiento, mayor resolución y número de bandas en la electroforesis 1D. En 2DE los dos métodos permitieron la extracción de proteínas con puntos isoeléctricos en el rango de pH 3-10, pero el método TCA-Acetona-Fenol conllevó a una extracción diferencial, favoreciendo el rango de 33 a 113 kDa. Estos resultados se constituyen en una primera aplicación de técnicas de separación electroforética para futuros estudios proteómicos