Las levaduras y los mohos son gérmenes que no se deben encontrar en muestras de leche porque son potencialmente patógenos tanto para los animales como para el ser humano. Debido a su alta manipulación durante la recolección, almacenamiento y transporte, la leche es susceptible de contaminación con estos microorganismos, por lo cual su detección en este alimento en estas fases, es relevante con el fin de prevenir posibles situaciones que comprometan la salud pública. El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de mohos y levaduras en muestras de tanques de enfriamiento de leche en el Altiplano Boyacense. Se tomaron muestras de 20 tanques de enfriamiento de leche cruda ubicados en 20 diferentes municipios lecheros del departamento de Boyacá con el fin de determinar la presencia de mohos y levaduras a través de Compact Dry YM®. El 35% de las muestras de leche no presentó crecimiento de mohos ni de levaduras, por su parte, en el 25% se encontró crecimiento de colonias de color amarillo y sus tonalidades, lo que correspondería con colonias de mohos, en el 5% se determinó el crecimiento únicamente de colonias azules, correspondiente a crecimiento de levaduras. En el 35% restante se detalló un crecimiento de colonias azules y amarillas. Esto demuestra que existe un alto porcentaje mohos y levaduras en muestras de leche cruda refrigerada, situación que podría desencadenar un problema de salud pública.