Ignoramos la fecha exacta de su nacimiento y el lugar. Probablemente es el año 560 en la ciudad de Cartagena, de la que era duque su padre Severiano. Su familia se traslada a Sevilla, otra de las posibles ciudades de nacimiento de Isidoro. Tuvo tres hermanos: Leandro, Florentina y Fulgencio, todos santos. Huérfano muy joven, queda su educación en manos de su hermano Leandro, arzobispo de Sevilla, quien le da una sólida formación en la cultura cristiana y clásica. Isidoro aprovecha esta formación para combatir la herejía arriana expandida en España entre los godos invasores, y logra su conversión celebrada en el tercer concilio de Toledo del 589. Reemplaza a su hermano Leandro como arzobispo de Sevilla. Su actividad es muy fuerte convocando un sínodo de la provincia de Cartagena y presidiendo el cuarto concilio nacional de Toledo del 633, clave para la vida religiosa, civil y política de España. Muere el 4 de abril del 636.