Este artículo tiene como objetivo validar los ítems de escala de la entrevista de actitudes del profesor de Biología hacia las prácticas de enseñanza de la Biología a través de TIC, para ello se tuvo en cuenta un diseño metodológico interpretativo que dispuso de cuatro etapas: 1º etapa de revisión documentada, 2º construcción del instrumento desde la teoría, 3º validación del instrumento el cual involucró validación de expertos y validación interna a partir del alfa de Cronbach y 4º procesamiento donde los datos obtenidos fueron analizados a partir de criterios valorativos correspondientes a la escala Likert. El instrumento fue aplicado a 34 profesores expertos que han integrado las TIC en la enseñanza de la Biología. Los datos revelan que los ítems y las subcategorías construidas del instrumento presentan una fuerte consistencia interna que permite determinar las actitudes de los profesores y puede ser replicado en otras investigaciones.