Introduccion:el conocimiento del personal de la salud sobre prevencion de infecciones asociadas a la atencion en salud y las practicas de medidas higienicas y bioseguridad pueden ser factores de riesgo para la aparicion de estas infecciones que son un indicador de la calidad de atencion en hospitales. Objetivo: determinar el nivel de conocimiento y aplicacion de medidas preventivas sobre infecciones asociadas a la atencion de salud en un hospital de la ciudad de Cartagena Bolivar.Materiales y Metodos: se realizo un estudio descriptivo, transversal en un hospital de tercer nivel de atencion en el ano 2012. Se aplico una encuesta a 184 profesionales de la salud de todos los turnos para evaluar nivel de conocimiento y aplicacion de medidas preventivas sobre infecciones asociadas a la atencion de la salud. Resultados:el 98,9% del personal encuestado tuvo un nivel de conocimiento bueno. Ningun profesional respondio correctamente cual era la secuencia de pasos para el lavado de manos. El 59,8% de los encuestados siempre utilizo medidas preventivas con respecto a las IAAS. Conclusion:los profesionales que laboran en la institucion hospitalaria evaluada tienen un nivel de conocimiento bueno pero desconocen como realizar un adecuado proceso de lavado de manos.