Los nematodos entomopatógenos son organismos habitantes del suelo que interactúan como importantes reguladores de su ecosistema, los cuales son utilizados como controladores de plagas en cultivos de importancia comercial. En este estudio se determinó la presencia de nematodos nativos en suelos provenientes de cultivos de caña panelera de los municipios de Supía, Riosucio y Filadelfia del departamento de Caldas. Se evaluó igualmente la mortalidad que causan dichos organismos sobre larvas de Diatraea saccharalis. Se encontraron 15 aislamientos pertenecientes al género Steinernema y 6 al género Heterorhabditis. Se seleccionaron 10 de los aislamientos de nematodos más virulentos sobre Galleria mellonella (nueve de Steinernema y uno de Heterorhabditis) para inoculación in vitro sobre larvas de último instar de D. saccharalis, empleando el método de inmersión, mostrando mortalidades entre el 10% y el 52%, 72 horas después de la infestación. Estos resultados contribuyen al conocimiento de la diversidad de nematodos entomopatógenos en el departamento de Caldas y dan una perspectiva del posible empleo de estos organismos como un componente importante del manejo integrado de Diatraea en caña panelera.