RESUMEN: Objetivo: Determinar la prevalencia de Leptospira spp.en humanos y bovinos del municipio de Toca (Boyacá) mediante la técnica de Microaglutinación-lisis (MAT) e identificar los serovares de Leptospira presentes en los hatos lecheros.Materiales y Métodos: Se realizó un estudio de corte transversal, con el fin de determinar anticuerpos contra diversos serovares de Leptospira spp.Se tomaron muestras de sangre en tubos sin anticoagulante de 37 trabajadores y 133 hembras bovinas del municipio de Toca (Boyacá).El análisis de laboratorio se hizo a través de la técnica de MAT.Los serovares investigados fueron icterohaemorrhagiae,pomona, hardjo, canicola, sejroë y autumnalis.Resultad os: Se encontró una prevalencia en bovinos del 54,2% (64/133), además positividad para los serovares L.