La caracterización de bacterias ácido lácticas del género Lactobacillus aisladas y seleccionadas de líquido ruminal vacuno en el Municipio Colon del estado Zulia, se llevó a cabo mediante el muestreo de animales post-morten en el centro de matanza y servicio de distribución de carnes “FIBASA”. Dichas muestras fueron diluidas a diferentes concentraciones desde 10-1 – 10-7 y sembradas en placas, obteniendo con ello colonias bacterianas, las cuales fueron evaluadas in-vitro con pruebas de crecimiento, forma, color, tamaño, movilidad, presencia de esporas, producción de ácido láctico, fermentación de carbohidratos, resistencia a ácidos (2,5 – 6,5) y perfiles térmicos desde (4°C – 50°C). Con ello se logró caracterizar dos cepas (L1 y L2), cuyo análisis bioquímico y morfológico las ubica dentro del género Lactobacillus, estas cepas presentaron una alta actividad antagónica contra bacterias patógenas, los que las convierte en un potencial probiótico para la alimentación animal.