Las propiedades fitoquimicas del aceite esencial (AE) producido por Aloysia triphylla (L’Her.) Britton (Verbenaceae), le han permitido posicionarse en el mercado global de plantas aromaticas y medicinales. Sus altas demandas y bajo rendimiento en el proceso de extraccion a partir de hojas secas han conducido a su sobre-explotacion. Las tecnicas de micro-propagacion representan una alternativa para su produccion. El objetivo de este trabajo fue la determinacion de condiciones necesarias para el establecimiento de cultivos In vitro de esta especie. Los resultados obtenidos indican que el proceso de desinfeccion de explantes es determinante, y se encontro que la inmersion de hojas en HgCl2 al 0,2% p/v durante cinco (5) minutos permite la obtencion de mas de un 80% de explantes viables y libres de contaminacion. Ademas, se logro la generacion de callos friables usando 4 mg/L de 6-bencil amino purina (BAP) bajo condiciones de oscuridad. Finalmente, se obtuvieron muy buenos resultados (86,3 ± 6,7%) en la produccion de plantulas In vitro con 2,0 mg/L de benciladenina (BA). Estos resultados muestran la viabilidad de utilizar las tecnicas de cultivo In vitro para la produccion de AE a partir de A. triphylla, aunque aun deben ser evaluados los rendimientos del AE en terminos de calidad y productividad