El objetivo del estudio fue establecer valores de referencia para las concentraciones séricas de la hormona estimulante de la tiroides (TSH) y tetrayodotironina libre (T4L) en caninos adultos de la zona de Caldas, Colombia y las posibles diferencias atribuidas al sexo. Las muestras de sangre se recolectaron de 78 caninos enteros (40 hembras y 38 machos mayores de un año), en ayunas, y se determinaron los niveles de TSH y T4L mediante inmunoensayo enzimático con kits comerciales. Los valores de TSH para las hembras fueron de 0.53 ± 0.96 μUI/ml (rango de 0.02 a 4.54) y para los machos de 0.36 ± 0.27 μUI/ml (0.02 a 0.91). Los valores de T4L para las hembras fueron de 1.08 ± 0.40 ng/dl (0.52 a 2.09) y para los machos de 1.07 ± 0.39 ng/dl (0.5 a 2.18). No hubo diferencia estadística entre sexos para TSH y T4L.