Objetivo Determinar la seroprevalencia de anticuerpos contra Leptospira sp. y los serovares dominantes, en poblacion urbana humana y canina de tres municipios del departamento del Tolima, Colombia. Materiales y Metodos Se realizo un estudio epidemiologico trasversal con seleccion de sujetos por conveniencia en 62 barrios. Se obtuvieron muestras de 850 personas.y 850 caninos durante los meses de junio, julio y agosto de 2007, las cuales fueron procesadas utilizando la prueba de microaglutinacion (MAT). En la prueba se incluyeron 5 serovares: Hardjo, Pomona, Grippotyphosa, Canicola, Icterohaemorrhagiae y Bratislava. La prueba se interpreto como positiva por la presencia de una aglutinacion >50 % de las leptospiras con uno o mas serovares, en una dilucion del suero >100 para las dos especies. Resultados Se encontro evidencia de infeccion en el 6 % de la poblacion humana y en el 21,4 % de los caninos, con al menos uno de los serovares. La mayor reactividad fue para los serovares Pomona y Grippotyphosa para humanos y caninos. Se presentaron coaglutinaciones en el 13,7 % de los sueros humanos y en el 4,4 % de los caninos. Fue evidente la disminucion de la frecuencia de aglutinacion de los serovares Canicola e Icterohaemorrhagiae en los perros. Conclusiones Se observa un cambio en el patron de presentacion de la leptospirosis en poblaciones urbanas, siendo necesario fortalecer la vigilancia epidemiologica activa y pasiva, la implementacion de pruebas rutinarias de diagnostico y medidas de prevencion especifica en los reservorios animales.