Se evaluó el proceso fermentativo e inhibición in vitro de L. lactis en Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis; así mismo, el crecimiento de L. lactis a tres pH (2,5, 4,5 y 7), sales biliares (0,5, 1 y 2 %), bilis bovina (1 y 1,2 %) y dos temperaturas (38 y 45 °C). Se determinaron péptidos y ácidos orgánicos en sobrenadante de L. lactis por HPLC. Se hizo cinética de fermentación en la que se evaluó: pH, azúcar total, proteína y ácido láctico. Se realizó antibiograma de dicloxacilina, cefepime, penicilina y cefalotina. Se definió la inhibición de L. lactis y su sobrenadante en cepas patógenas. El mejor crecimiento fue a pH de 2,5 (3 × 1012 UFC/ml); de 1 × 1010 y 4 × 109 UFC/ml para 0,5 % de sales biliares y 1,2 % de bilis bovina, respectivamente; de 3,5 × 1013 y 3,4 × 1013 UFC/ml para 38 y 45 °C, respectivamente. El HPLC determinó los péptidos VAR-TIR-VAR y ácido láctico (83,11 %). La cinética de fermentación determinó la fase exponencial a 14:24 h con un valor 77 × 1010 UFC/ml, valores de pH de 4,284, azúcar 2,33 mg/ml, proteína 1,44 mg/ml y acidez de 0,79 %. Se encontró que S. aureus y S. epidermidis fueron sensibles a todos los antibióticos. Las bacterias patógenas fueron resistentes a la cepa láctica, pero S. epidermidis fue sensible al sobrenadante de L. lactis. Se concluye que Lactobacillus lactis mostró adecuada capacidad de crecimiento, buenos parámetros de fermentación y efecto inhibitorio en cepas de S. aureus y S. epidermidis en condiciones in vitro.