Objetivo: Determinar la presencia y susceptibilidad antimicrobiana del grupo estafilococo coagulasa negativo (ECN) en algunas fincas ganaderas de Tolima, Colombia. Materiales y métodos: Mediante la prueba de California para el diagnóstico de mastitis (CMT), se evaluaron 484 cuartos pertenecientes a 121 vacas de cinco fincas ganaderas de pequeña producción de una región del centro de Tolima. Las muestras positivas al CMT se cultivaron para aislamiento bacteriológico. A los ECN encontrados se les realizaron pruebas de susceptibilidad frente a los antibióticos. Los resultados se analizaron con estadística descriptiva. Resultados: 252 (52 %) cuartos no presentaron ningún tipo de reacción al CMT, ni signos clínicos de mastitis, por lo cual se consideraron libres de la enfermedad. De los cuartos, 73 (15 %) fueron positivos para CMT y cultivo bacteriológico. De estos se aislaron 36 cepas de ECN (7,4 % del total de cuartos); S. aureus-ECP, 28 (5,8 %); Streptococcus spp., 6 (1,2 %); Escherichia coli, 2 (0,4 %), y Klebsiella pneumoniae, 2 (0,2 %). La mastitis clínica y subclínica en el cuarto se presentó en 1,4 % y 13,6 %, respectivamente. En 5 (1,0 %) de los cuartos se encontró mastitis clínica causada por ECN y mastitis subclínica en 31 (6,4 %). El 61 % de las cepas de ECN fue resistente a penicilina, y el 58 %, a tetraciclina; el 97 % fue sensible a cefoperazona. Conclusión: El grupo ECN, considerado un emergente mundial de mastitis, es evidenciado con alta frecuencia en fincas ganaderas de Tolima, Colombia, lo que causa mastitis clínica y subclínica con variada respuesta a los antimicrobianos.