Los estudios de expresion transitoria de genes heterologos de interes biotecnologico son un paso previo a su expresion estable en plantas transgenicas. El objetivo del trabajo fue optimizar las condiciones de biobalistica para realizar ensayos de expresion transitoria de genes heterologos en Nicotiana tabacum va-riedad Xanthi (tabaco) utilizando la pistola de genes de baja presion Helios® Gene Gun (BioRad®). Como gen heterologo se utilizo al promotor 35S de CaMV fusionado al gen uidA (GUS) clonado en el vector pBI121. Las condiciones evaluadas fueron: presion de disparo, numero de disparos y distancia de disparo sobre discos de hojas u hojas completas de tabaco cultivadas in vitro. La expresion de GUS se evaluo como el promedio del numero de puntos azules observados en los tejidos bombardeados. Unicamente se observaron puntos azules cuando se utilizaron hojas completas de tabaco. Se observo un mayor numero de puntos azules cuando se utilizo una presion de 160 psi, cuatro disparos y un bombardeo directo sobre hojas completas. Para confirmar las condiciones obtenidas se utilizo el vector pCAMBIA 1305.2, obser-vandose un alto numero de puntos azules en los tejidos bombardeados, indicativo de la eficiencia de las condiciones optimizadas en el presente trabajo.