La sarna polvosa de la papa es causada por Spongospora subterranea f. sp. subterranea, parasito obligado y patógeno del suelo, que afecta el sistema radicular y tubérculos de papa. Igualmente es vector del pomovirus Potato mop-top virus (PMTV). Este organismo posee quistosoros como estructuras de resistencia las cuales le confieren la posibilidad de permanecer en el suelo por años. Este estudio busca determinar bajo que condiciones de temperatura, fuentes de inóculo y sustratos se obtiene una máxima liberación de zoosporas con el fin de utilizar esta metodología en pruebas de infección de S. subterranea. Así se realizaron tres ensayos donde se evaluaron tres fuentes de inóculo (suelo, raíz, tubérculo), tres medios líquidos (agua, extracto de raíz y solución nutritiva) y diferentes temperaturas. Las observaciones fueron realizadas en microscopio con cámara de Neubauer por conteo de zoosporas móviles, con lecturas en el tiempo a partir de las 24 hasta las 120 horas. Se encontró como resultado diferencias significativas en los sustratos empleados para liberación manifestándose mayor liberación de zoosporas en extracto de raíz en temperatura fluctuante de 20-15°C a partir de las 24 horas de inoculación hasta las 96 horas.