RESUMENObjetivo. La medición de la actividad colinesterasa (ChE) es una prueba rápida y económica que se emplea en el diagnóstico de intoxicaciones por insecticidas organofosforados y carbamatos. Como la interpretación por el laboratorio requiere valores de referencia para cada especie, en este estudio se establecieron las actividades de ChE normales en sangre, cerebro y retina de varias especies de animales domésticos mediante el método de Ellman. Materiales y métodos. Se obtuvieron encéfalos y globos oculares en el matadero central de Medellín, mientras que las muestras de sangre procedieron de animales remitidos al laboratorio de diagnóstico clínico de la Universidad de Antioquia. Resultados. Las medias (±D.E.) de actividad ChE sanguínea, expresada en μmoles de acetiltiocolina iodada hidrolizada/min/mL, fueron de 2.4± 0.2, 1.5±0.3, 1.9±0.3 y 2.5±0.2 para caninos, felinos, equinos y bovinos, respectivamente. En el encéfalo, la actividad ChE (μmol/min/g peso fresco), fue de 4.0±0.4, 5.4 ±0.3 y 4.9±0.3, en bovinos, porcinos y caninos, respectivamente. La retina bovina mostró una actividad de 21.7±2.45 μmol/min/g. Conclusiones. Los valores obtenidos coinciden ampliamente con los reportados por laboratorios certificados por la Asociación Americana de Laboratorios de Diagnostico Veterinarios (AAVLD), corroborando la buena reproducibilidad de la técnica y validando su uso como apoyo al diagnóstico de intoxicaciones por insecticidas inhibidores de la colinesterasa.