O objetivo deste estudo foi obter estirpes mutantes de L. delbrueckii UFV H2b20 com tolerância acentuada ao congelamento e também avaliar o efeito de substâncias crioprotetoras na sua viabilidade durante a estocagem. A utilização dos crioprotetores sacarose, glutamato monossódico (GMS) e leite desnatado reconstituído a 10 % (LDR) aumentaram a viabilidade de estirpes mutantes durante 15 dias de estocagem a -20 °C em relação ao controle (sem crioprotetor). Os crioprotetores sacarose e LDR 10 % foram efetivos na manutenção da viabilidade da estirpe selvagem durante o período de estocagem. Embora a tolerância ao congelamento tenha sido alcançada, estudos posteriores são necessários para avaliar se outras características que qualificam Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 como probiótico foram afetadas.