Objetivo. Aislar Rickettsias mediante cultivo celular a partir de muestras de garrapatas Amblyomma ovale y Amblyomma incisum del estado de São Paulo Materiales y métodos. A. ovale y A. incisum adultas de vida libre fueron colectadas en una área de selva tropical Atlántica en el estado de São Paulo, Brazil. Cada garrapata fue sometida a la prueba de hemolinfa, las garrapatas positivas en esta prueba fueron evaluadas con la técnica de shell vial con el propósito de aislar rickettsias en cultivo de células Vero. Pasajes celulares de los aislados fueron identificados genotípicamente por la reacción en cadena por la polimerasa (PCR) dirigidos a fragmentos de tres genes de rickettsias (gltA, htrA y ompA), seguido por secuenciación de ADN. Resultados. Un total de 388 A. incisum y 50 A. ovale fueron colectadas. Por la prueba de hemolinfa, únicamente una A. incisum y una A. ovale fueron positivas. Las Rickettsias fueron exitosamente aisladas de estas garrapatas. Sin embargo, el cultivo continuo en células Vero fue posible sólo para la garrapata A. ovale, debido a contaminación bacteriana en el primer pasaje celular de la muestra de A. incisum. Los productos de PCR fueron obtenidos con los primers gltA y htrA para los dos aislados, no obstante, ningún producto fue obtenido con los primers ompA. Por análisis BLAST, secuencias parciales de gltA y htrA procedentes de los aislados de A. ovale y A. incisum fueron similares a las secuencias correspondientes a R. bellii. Conclusiones. Este es el primer reporte de R. bellii infectando A. incisum y el primer establecimiento exitoso de un aislado de A. ovale. Palabras clave: Rickettsia bellii, Amblyomma ovale, Amblyomma incisum, Brasil.