INTRODUCCIÓN Las especies de Anopheles Varían en su capacidad de transmitir los parásitos causantes de la malaria; por ello, es importante realizar estudios para conocer cuáles son las especies de Anopheles presentes en áreas endémicas para la enfermedad y determinar su papel en la transmisión. OBJETIVO Determinar las especies de Anopheles involucradas en la transmisión de malaria en la localidad de Juan José, Puerto Libertador, Córdoba, Colombia. MATERIALES Y MÉTODOS La infectividad natural por Plasmodium vivax VK210, P. vivax VK247 Y Plasmodium falciparum se evaluó por ELISA, empleando la cabeza y el tórax de cinco mosquitos de la misma especie por pozo. Los resultados de ELISA con valores mayores al punto de corte se confirmaron por una segunda ELISA y por PCR anidada. RESULTADOS De 2.054 especímenes evaluados por ELISA, 2.038 fueron Anopheles (Nyssorhynchus) nuneztovari Gabaldón; de estos, tres especímenes se encontraron infectados, dos con P. vivax VK210 y uno con P. falciparum, representando una tasa de infección de 0,15% De 16 Anopheles (Nys.) darlingi Root evaluados, no se encontró ninguno infectado. CONCLUSIONES An. nuneztovari s.l. yAn. darlingi, vectores primarios de malaria en Colombia, se hallaron presentes en la localidad de Juan José, Puerto Libertador, sin embargo, solo An. nuneztovari s.l. se halló infectado, indicando su participación en la transmisión en esta localidad. La realización de nuevos muestreos en Juan José permitirá una mejor comprensión del papel de An. darlingi en la transmisión. La información obtenida contribuirá al diseño e implementación de medidas de control dirigidas y efectivas.