En el presente articulo se describe la normalizacion de la prueba de RT-PCR para ser empleada como herramienta en la deteccion del Virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB). Los iniciadores utilizados amplificaron un sector de 280 pb que se encuentra dentro del extremo 5’ UTR del genoma viral. Para el proceso de normalizacion, se uso como control positivo, cepas de referencia de VDVB (NADL, Osloss). Para evaluar reaccion cruzada se uso una cepa de virus de Enfermedad de las Fronteras (BD). La obtencion del cDNA se realizo por el metodo de «random primers» (iniciadores aleatorios). La prueba detecto tanto cepas citopaticas, como no citopaticas del VDVB. El protocolo establecido demostro un buen funcionamiento in vitro y es la base para posteriores pruebas de validacion y evaluacion de la prueba diagnostica.