Objetivo Determinar la seroprevalencia de anticuerpos a Leptospira spp. en población humana aparentemente sana y en grupos a riesgo y los factores asociados en el Municipio de Villavicencio, Meta, Colombia. Materiales y Métodos Se utilizó un modelo epidemiológico transversal con selección de sujetos por conveniencia. Se obtuvieron muestras de sangre por punción cubital de (n: 503) personas, 230 estudiantes de primer semestre de diversos programa de la Universidad de los Llanos y 273 que correspondían a 8 grupos de riesgo. Se obtuvo información de factores de riesgo mediante entrevista. Se determinaron anticuerpos IgM mediante un Kit comercial de ELISA indirecto (Pambio). Resultados La seroprevalencia en el grupo de bajo riesgo fue 5,2 %. La seroprevalencia para los grupos de riesgo fue 19 %, por grupos trabajadores de matadero 7 %, veterinarios y auxiliares de clínica de pequeños animales 17 %, estudiantes de último año de Medicina Veterinaria y Zootecnia 17 %, ordeñadores de granjas de ganado doble propósito 21 %, trabajadores de arrozales 23 %, trabajadores de granjas porcícolas 35 %, trabajadores de piscícolas 48 %. Se encontraron tres factores asociados: estrato rural, tenencia de mascota canina y contacto con roedores en el trabajo. Conclusiones Se encontró una alta seroprevalencia para Leptospira spp en grupos de riesgo, siendo los más afectados los trabajadores piscícolas y de granjas porcícolas. El riesgo relativo de 1,86 entre los dos grupos señalan mayor riesgo de contagio en la población con exposición ocupacional.