Introduccion: Bixa orellana L. (annatto) es un arbusto originario de Suramerica que se cultiva por el pigmento rojo-naranja proveniente de sus semillas utilizado en la industria alimentaria como colorante natural y al cual se le ha atribuido propiedades funcionales como antioxidantes y antimicrobiano. Objetivo: Optimizar el proceso de lixiviacion de los compuestos bioactivos de las semillas de B. orellana para evaluar sus propiedades antimicrobianas y antioxidantes, asi como el efecto del pH sobre las propiedades antioxidantes. Metodos: Para optimizar el proceso de lixiviacion de compuestos bioactivos de las semillas de B. orellana se utilizo el metodo de superficies de respuesta y se aplico un diseno factorial central compuesto en el cual se considero el efecto de los siguientes factores: pH (3-10), relacion semilla/solvente (R ss ) (1:2–1:6) y concentracion de etanol (C OH ) (50%-96%) sobre las variables respuestas: fenoles totales (F t ) y carotenos totales (C t ). Se evaluo la actividad antimicrobiana mediante el metodo colorimetrico de microdilucion en caldo y la actividad antioxidante mediante los metodos de FRAP y ABTS. Resultados: Los valores de los factores que maximizaron el proceso de lixiviacion fueron: pH: 4,0; R ss : 1:5 y C OH : 80,0%. Se obtuvieron valores preestablecidos de 2,12 (g AG /5g semilla) para F t y 313,68 mg Ct /g extracto para C t con sesgos relativos de -16,88% y -4,64% respectivamente. La cinetica de liberacion maxima de compuestos bioactivos bajo condiciones optimas de extraccion, fue lograda entre 240 y 270 min. Las concentraciones minimas inhibitorias del extracto optimizado fueron 2 048µg/mg contra Listeria monocytogenes , 1 024µg/mg contra Escherichia coli , 64µg/mg contra Staphylococcus aureus y 8µg/mg contra Bacillus cereus . Se observo que el pH tiene efecto estadisticamente significativo sobre la actividad antioxidante del extracto optimizado. Conclusiones: Se optimizo el proceso de lixiviacion con los siguientes valores para los factores: pH: 4,0; R ss : 1:5 y C OH : 80,0%. Se comprobo la actividad antimicrobiana in vitro y el efecto estadisticamente significativo del pH sobre la actividad antioxidante del extracto. Palabras clave: B. orellana ; lixiviacion; compuestos bioactivos; actividad antimicrobiana; actividad antioxidante.